體外無血清細胞培養基制備技術


       本公司無血清培養基的制備技術通過改良基礎培養基的現有成分,篩選并優化外源補充因子的組合及濃度,應用Bottom-UP法即一次一因子法,先篩選適于目的細胞生長的基礎培養基,再逐個檢測外源因子對細胞生長、増殖的影響,留下對細胞生長及增殖有正 效 應 作 用 的 因 子 。篩 選 實 驗 包 括 單 因 素 分 析 法 、部 分 析 因 設 計 、正 交 實 驗 和 P l a c kett-Burnian設計(PB設計)等。實驗中,根據需要檢測的因素數量選取不同的設計方法。其中,PB設計主要應用于培養基組分的篩選,通過對實驗模型內的因子取兩水平進行實驗,比較個體差異和整體差異的關系確定關鍵作用因子,這種設計方法簡單高效,能夠避免前期篩選實驗的重復及后期優化實驗中的資源浪費,是培養基組分篩選中優選方法。

        優化設計是在篩選實驗進行后對關鍵作用因子進行濃度優化的方法,主要包括最速上升法、響應面設計、全因子實驗等。最速上升法通常應用于PB設計后,沿著響應值上升方向逐步逼近最優區域。而響應面設計一般將因子數控制在2-3個,利用多元線性方程建模后,分析因子的交互作用,預測達到極大值所需的條件,以期達到最優效果。響應面分析能夠充分考慮到各組分間的作用,但是由于響應面設計涉及的因子數目有限,因此我們通過連續應用最速上升法和響應面設計進行因子的濃度優化。

        本公司應用成熟的篩選及優化方法,成功研制多種化學成分明確、無異源物質的無血清培養基,依據培養基技術要求進行生產工藝開發及驗證,建立了完善的無血清培養基生產工藝流程并進行產業化生產。
 


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