穩轉細胞系構建技術服務項目
一、服務概述
        穩轉細胞系是指在細胞中持續穩定表達特定基因或沉默特定基因表達。構建穩轉細胞系的基本原理是用轉染質粒或病毒感染的方法將構建好的含外源DNA的載體導入細胞,根據不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應的藥物進行選擇性篩選,得到可穩定表達目的蛋白,或者穩定沉默特定基因表達的細胞系。常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。
        目的蛋白的過表達或沉默往往是硏究該基因/蛋白功能的常規手段。在基因功能的研究中,基因是否有效轉染靶細胞,是功能研究的前提條件之一。而穩定表達細胞系則彌補了瞬時感染(或轉染)中外源基因表達時間短的缺陷,便于長期觀察基因對于細胞功能的影響以及蛋白間相互作用。
        此外,目的蛋白如重組抗體、細胞因子等的過表達細胞系可用于該目的蛋白的大量生產。
        默賽爾生物有著多年構建穩轉細胞株的經驗,已在多個種屬細胞中成功構建過表達和RNAi穩轉細胞株。 

二、服務內容
1. 基因過表達、沉默等科研用穩定細胞系的構建;
2. 重組抗體、細胞因子等生產蛋白用穩定細胞系的構建。

三、服務優勢
1. 擁有成熟的穩轉細胞系篩選平臺,技術多樣化,并且可以結合客戶特殊需求,靈活地定制服務。
2. 對外源基因表達進行嚴格鑒定,有多種檢測方法:q-PCRRT-PCRWestern blotimmunofluorescenceELISAFACS
3. 質量保證:穩轉細胞系無細菌、真菌及支原體污染,其生長狀態、活率及目的蛋白表達水平可長期保持穩定。

四、服務示例(以PSK2基因過表達CHO穩轉細胞系為例)
1PSK2基因慢病毒表達質粒構建
 
PSK2基因慢病毒表達質粒pLVX-CMV-GFP-PSK2構建
2 pLVX-CMV-GFP-PSK2質粒酶切鑒定圖
2)多克隆穩定細胞株篩選及鑒定
 
3 G418篩選的GFP-PSK2穩定表達的多克隆CHO細胞系
 
野生型CHO細胞(WT-CHO)與GFP-PSK2穩定表達的多克隆CHO細胞中PSK2蛋白表達的WB檢測圖
3)單克隆穩定細胞株篩選及鑒定
5 G418篩選的GFP-PSK2穩定表達的單克隆CHO細胞系
 
野生型CHO細胞(WT-CHO)與GFP-PSK2穩定表達的單克隆CHO細胞中PSK2蛋白表達的WB檢測圖
 
五、服務價格及周期
服務編號 服務項目 價格 服務周期
RS004-1 目的基因過表達慢病毒表達質粒構建   1-2
RS004-2 目的基因沉默的shRNA慢病毒質粒構建   1-2
RS004-3 目的基因過表達慢病毒制備   3-4
RS004-4 目的基因沉默的shRNA慢病毒制備   3-4
RS004-5 宿主細胞抗生素篩選濃度確認   1-2
RS004-6 多克隆穩定細胞株篩選及鑒定   5-6
RS004-7 單克隆穩定細胞株篩選及鑒定   7-8
 
六、技術服務流程
1. 用戶下載并填寫穩轉細胞系構建技術服務協議書,發送至service@morecell.com.cn
2. 雙方確認并簽訂技術服務協議書,按照協議內容進行技術服務。

七、客戶須知
1. 客戶提供需過表達或沉默的基因/蛋白相關信息;
2. 客戶提供需穩轉的宿主細胞系。

八、交付結果
1. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒表達質粒(4ug)和相應的慢病毒(1mL)
2. 多克隆穩定細胞系或單克隆穩定細胞系(干冰運輸或活細胞培養);
3. 完整的實驗報告。

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