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質粒構建技術服務項目
一、服務概述
        分子克隆方法所用的載體基于質粒,是一種不依賴基因組 DNA 在細菌內復制的雙鏈游離DNA。用體外重組方法將目的基因插入質粒,形成重組質粒,再通過轉化的方式,引入適合的寄主細胞內,進行復制與擴增,然后再從篩選的寄主細胞內分離提純所需的克隆載體,得到重組質粒拷貝,從而獲得目的基因的擴增。基于質粒的克隆載體包含幾個關鍵要素:細菌宿主細胞內能有效增殖;質粒含有多克隆位點 (MCS),可插入目的片段;以及載體成功轉化后篩選標記。
        作為現代分子生物學研究中的基本手段,質粒構建幾乎是每個實驗室和大部分實驗人員都必須掌握的基本實驗技能,應用范圍非常廣泛。自Cohen1973年構建第一個質粒pSC101以來,克隆載體的種類和用途等都有了很大發展。大部分實驗技術人員或經過培訓的研究生都能夠熟練掌握該項技術。但是,由于質粒構建費時、費力,越來越多的實驗室開始將質粒構建等繁瑣的工作外包給生物技術公司來完成,以節省時間、提高工作效率。

二、服務內容
1. 設計引物,從克隆載體(或基因組、cDNA模板)上擴增目的基因片段。
2. 處理載體,進行目的基因與載體的連接。
3. 轉化連接目的基因的載體,并轉化感受態,鑒定陽性質粒。
4. 對連接目的基因的載體進行DNA測序。
5. 將陽性質粒保存菌種,質粒和測序報告提交給客戶。
6. 針對客戶要求對現有質粒結構進行改造。

三、技術優勢
1. 可提供常規質粒載體(包含原核表達、真核表達、慢病毒過表達等):
1)亞克隆載體: pUC19
2TA克隆載體:pEASY
3)原核表達載體:pET-28a (+)
4)真核表達載體:pcDNA3.1 Zeo(+)pcDNA3.1 Neo(-)
5)慢病毒過表達載體:pMSCV-puro
2. 公司已建立了針對質粒嚴格的工藝標準,包括DNA測序、酶切鑒定、PCR鑒定等;
3. 公司具有完備的技術手段,不僅能夠從頭拼接質粒,也能夠針對客戶要求對現有質粒結構進行改造。

四、服務提供圖片
1. 菌液PCR結果
1菌液PCR結果
2. 質粒酶切鑒定結果
凝膠模擬結果
實際凝膠電泳結果

3. 質粒測序鑒定結果
質粒測序鑒定結果
4. 質粒圖譜
質粒圖譜
 
五、服務價格與周期
服務編號 服務項目 價格 服務周期
RS003-1 構建片段≤1.5kb(客戶提供載體)   10-15
RS003-2 構建片段>1.5kb,≤3kb(客戶提供載體)   10-15
RS003-3 構建片段>3kb(客戶提供載體)   咨詢
RS003-4 構建片段≤1.5kb(公司提供載體)   10-15
RS003-5 構建片段>1.5kb,≤3kb(公司提供載體)   10-15
RS003-6 構建片段>3kb(公司提供載體)   咨詢
RS003-7 亞克隆服務(平末端連接pUC19   10-15
RS003-8 亞克隆服務(連接TA克隆載體)   10-15
RS003-9 設計引物擴增并回收PCR片段(客戶提供克隆載體)   10-15
RS003-10 設計引物擴增并回收PCR片段(客戶提供cDNA模板)   咨詢
 
六、客戶須知
1. 客戶自帶的載體(10-20ug)需提供詳細的酶切圖譜及相關信息(包括目的基因克隆載體和帶連接的載體)。
2. 由于某些基因表達產物會抑制宿主菌生長;因此,我們不保證所有的基因都能夠成功克隆并高效表達。
3. 客戶請提供載體改造的具體要求,需要改造的質粒(序列經測序驗證正確)及其圖譜和序列,能夠獲得所需元件或基因的模板(質粒或其它)及其相關圖譜和序列。
4. 對于載體改造和基因片段克隆,客戶需要提供載體、PCR產物或酶切產物、以及載體來源及基因背景資料等。

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